Определение парацетамола и ибупрофена в смешанном обращенно-фазовом режиме высокоэффективной жидкостной хроматографии с π-взаимодействиями при использовании неподвижной фазы с N-алкилзамещенным 2,4-динитроанилиновым селектором

Для разработанной неподвижной фазы AWE-241 с N-алкилзамещенным 2,4-динитроанилиновым селектором впервые продемонстрирована возможность работы в бимодальном режиме ВЭЖХ, основанном на сочетании дисперсионных взаимодействий и гидрофобного эффекта (обращенно-фазовый режим) и стэкинговых параллельно-смещенных π-взаимодействий (квазинормально-фазовый режим). Гидрофобная природа ароматического селектора, замещенного двумя нитрогруппами, позволяет работать в обращенно-фазовом режиме, а его электронодефицитный характер обеспечивает дополнительное удерживание за счет стэкинговых параллельно-смещенных π-взаимодействий, диполь-дипольных взаимодействий и взаимодействий посредством водородных связей. Подобное сочетание типов химических взаимодействий позволяет селективно определять вещества, содержащие ароматическую группу, в том числе полярные, при работе в обращенно-фазовом режиме ВЭЖХ, а также одновременно определять полярные и гидрофобные соединения с ароматической группой без необходимости градиентного элюирования. Данное преимущество AWE-241 продемонстрировано в сравнении с коммерчески доступными аналогами для работы в обращенно-фазовом режиме жидкостной хроматографии (октилсилильная и октадецилсилильная фазы), а также наиболее популярными фазами, содержащими ароматические группы (фенилгексильной, пентафторфенильной и пиренэтильной), на примере совместного определения парацетамола и ибупрофена — действующих веществ двухкомпонентного лекарственного препарата «Ибуклин». Оценены метрологические характеристики разработанной методики определения парацетамола и ибупрофена с использованием неподвижной фазы AWE-241: диапазон определяемых содержаний — от 0,02 до 0,5 мг/мл, пределы обнаружения составили 0,3 и 0,7 мкг/мл для парацетамола и ибупрофена соответственно. Правильность определения подтверждена методом добавок.

1. Hyde A. Chromatographic separation technologies: an overview of the bioanalysis zone survey / Bioanalysis. 2020. Vol. 12. P. 505 – 508. DOI: 10.4155/bio-2020-0111

2. Snyder L. R., Kirkland J. J., Dolan J. W. Introduction to modern liquid chromatography. 3rd edition. — Hoboken: John Wiley & Sons, Inc., 2009. — 912 p.

3. Moldoveanu S. C., David V. Essentials in modern HPLC separations. — Amsterdam, Netherlands: Elsevier, 2022. — 716 p.

4. Gritti F., Walter T. Retention loss of reversed-phase columns using highly aqueous mobile phases: fundamentals, mechanism, and practical solutions / LCGC North Am. 2021. Vol. 39. No. 1. P. 33 – 40. DOI: 10.56530/lcgc.na.zm6986c6

5. Gritti F., Brousmiche D., Gilar M., et al. Kinetic mechanism of water dewetting from hydrophobic stationary phases utilized in liquid chromatography / J. Chromatogr. A. 2019. Vol. 1956. P. 41 – 53. DOI: 10.1016/j.chroma.2019.02.051

6. Przybyciel M., Majors R. E. Phase collapse in reversed-phase liquid chromatography / LCGC North Am. 2002. Vol. 20. No. 6. P. 516 – 523.

7. Deineka V. I., Oleinits E. Y., Deineka L. A. Simultaneous determination of monocaffeoylquinic acids and caffeine by reverse-phase high-performance liquid chromatography with eluents based on propanol-2 and ethyl acetate (rejection of acetonitrile) / Industr. Lab. Mater. Diagn. 2022 Vol. 88. No. 11. P. 14 – 21 [in Russian]. DOI: 10.26896/1028-6861-2022-88-ll-14-21

8. Artasyuk E. M. Improvement of methods of analysis of medicines with anti-inflammatory activity. PhD thesis.—Ulan-Ude, 2009. — 229 p. [in Russian].

9. Dolan J. W. Ion pairing—blessing or curse? / LCGC Eur. 2008. Vol. 21. No. 5. P. 258 – 263.

10. Wang P. G., He W. Hydrophilic interaction liquid chromatography (HILIC) and advanced applications. — Boca Raton: CRC Press, 2017. — 616 p.

11. Kumar A., Heaton J. C., McCalley D. V. Practical investigation of the factors that affect the selectivity in hydrophilic interaction chromatography / J. Chromatogr. A. 2013. Vol. 1276. P. 33 – 46. DOI: 10.1016/j.chroma.2012.12.037

12. Wan Q. Mixed-mode chromatography: principles, methods, and applications. — Singapore: Springer, 2021. — 495 p.

13. Lämmerhofer M., Nogueira R., Lindner W. Multi-modal applicability of a reversed-phase/weak-anion exchange material in reversed-phase, anion-exchange, ion-exclusion, hydrophilic interaction and hydrophobic interaction chromatography modes / ABC. 2011. Vol. 400. No. 8. P. 2517 – 2530. DOI: 10.1007/s00216-011-4755-3

14. Lemasson E., Richer Y., Bertin S. Characterization of retention mechanisms in mixed-mode HPLC with a bimodal reversed-phase/cation-exchange stationary phase / Chromatographia. 2018. Vol. 81. No. 3. P. 387 – 399. DOI: 10.1007/s10337-018-3477-5

15. Mansour F. R., Danielson N. D. Multimodal liquid chromatography of small molecules / Anal. Meth. 2013. Vol. 5. No. 19. P. 4955 – 4972. DOI: 10.1039/c3ay40302e

16. Lämmerhofer M., Richter M., Wu J., et al. Mixed-mode ion-exchangers and their comparative chromatographic characterization in reversed-phase and hydrophilic interaction chromatography elution modes / J. Sep. Sci. 2008. Vol. 393. P. 2572 – 2588. DOI: 10.1002/jssc.200800178

17. Thévenon-Emeric G., Tchapla A., Martin M. Role of ð – ð interactions in reversed-phase liquid chromatography / J. Chromatogr. A. 1991. Vol. 550. P. 267 – 283. DOI: 10.1016/s0021-9673(01)88544-7

18. Matsumoto K., Hayashi N. Heterocyclic supramolecules II / Topics in heterocyclic chemistry. Vol. 18. — Springer: Heidelberg, 2009. — 166 p. DOI: 10.1007/978-3-642-02041-4

19. Retained or not retained? How much is enough retention? https://www.waters.com/blog/retained-or-not-retained-how-muchis-enough-retention/?srsltid=AfmBOopNOZTn0y-iJCZ0XRJNqa8Kb7BzH_TYQxUZq1h2_Y0m74vU9LQ (accessed July 11, 2025).

20. Shackman J. G. LCGC blog: resolving resolution / LCGC Int. 2023. Vol. 19. No. 9. P. 25 – 27.

21. Ibuprofen & Paracetamol assay | Phenomenex. https://www.phenomenex.com/documents/2022/05/20/18/52/ibuprofen-andparacetamol-tablets-assay-and-related-substances-method-asper-ip-monograph?srsltid=AfmBOortAOJUcM_tTMPVorKGNDkAIDs_djuGRQupuPPJgS8ny_Jfs5vI (accessed October 12, 2025).

22. Jahan S., Islam J., Begum R., et al. A study of method development, validation, and forced degradation for simultaneous quantification of Paracetamol and Ibuprofen in pharmaceutical dosage form by RP-HPLC method / Anal. Chem. Insights. 2014. Vol. 9. No. 1. P. 75 – 81. DOI: 10.4137/aci.s18651

23. Balan P., Nimila I. C., Movva V. R. Validated RP-HPLC method for estimation of Dexibuprofen and Paracetamol in combined tablet dosage form / Int. J. Pharm. Tech. Res. 2011. Vol. 3. No. 3. P. 1293 – 1298.

24. Alsaad A. A. A., Alassadi E. A. S., Al-Salman H. N. K., Hussein H. H. The simultaneous determination of ibuprofen and paracetamol in pharmaceutical formulations by highperformance liquid chromatography with ultraviolet detection / Asian J. Pharm. 2019. Vol. 13. No. 2. P. 141 – 152.

25. Makwana S., Patel M., Singh B., et al. Development and validation of a stability indicating RP-UPLC method for the determination of Paracetamol and Ibuprofen in tablet / J. Chem. Pharm. Res. 2015. Vol. 7. No. 4. P. 1308 – 1315.

26. Tsvetkova B. G., Pencheva I. P., Zlatkov A. B. Development and validation of RP-HPLC method for simultaneous determination of Paracetamol and Ibuprofen in fixed dose combinations / Int. J. Pharm. Sci. Rev. Res. 2012. Vol. 16. No. 1. P. 13 – 16.

27. Lakka N. S., Goswami N., Balakrishna P. Development and validation of a RP-HPLC for simultaneous determination of Ibuprofen and Paracetamol in solid dosage forms: Application to dissolution studies / Int. J. Res. Pharm. Sci. (Madurai, India). 2011. Vol. 2. No. 3. P. 331 – 337

28. Borahan T., Unutkan T., ªahin A., et al. A rapid and sensitive Reversed Phase-HPLC method for simultaneous determination of ibuprofen and paracetamol in drug samples and their behaviors in simulated gastric conditions / J. Sep. Sci. 2019. Vol. 42. No. 3. P. 678 – 683. DOI: 10.1002/jssc.201801002

29. Penner N. A., Nesterenko R. N., Ilyin M. M., et al. Investigation of the properties of hypercrosslinked polystyrene as a stationary phase for high-performance liquid chromatography / Chromatographia. 1999. Vol. 50. Nos. 9 – 10. P. 611 – 620. DOI: 10.1007/bf02493669

30. Davankov V. A., Sychov C. S., Ilyin M. M., et al. Hypercrosslinked polystyrene as a novel type of high-performance liquid chromatography column packing material / J. Chromatogr. A. 2003. Vol. 987. Nos. 1 – 2. P. 67 – 75. DOI: 10.1016/s0021-9673(02)01914-3

31. Sychov C. S., Ilyin M. M., Davankov V. A., et al. Elucidation of retention mechanisms on hypercrosslinked polystyrene used as column packing material for high-performance liquid chromatography / J. Chromatogr. A. 2004. Vol. 1030. Nos. 1 – 2. P. 17 – 24. DOI: 10.1016/j.chroma.2003.10.098

32. Prokopov S. V., Tyrina E. V., Davankov V. A., et al. Quasinormal phase chromatography of nitrogen-containing adamantane derivatives / Russ. J. Phys. Chem. A. 2013. Vol. 87. No. 1. P. 114 – 119. DOI: 10.1134/s0036024413010184

33. Upyrenko E. V., Kurgachev D. A., Bakibaev A. A. Solvents eluotropic strength for parallel-displaced ð – ð interactions chromatography / Mendeleev Commun. 2025. Vol. 35. No. 2. P. 237 – 239. DOI: 10.71267/mencom.7576

34. US Pat. No. US3722181A, Kirkland J. J., Yates P. C. “Chromatographic packing with chemically bonded organic stationary phases,” filed October 25, 1972.

35. Luna C18(2) HPLC Columns. https://www.phenomenex.com/products/luna-hplc-column/luna-c18-2#documents (accessed October 12, 2025).

36. Wahab M. F., Patel D. C., Wimalasinghe R. M., et al. Fundamental and practical insights on the packing of modern highefficiency analytical and capillary columns / Anal. Chem. 2017. Vol. 89. No. 16. P. 8177 – 8191. DOI: 10.1021/acs.analchem.7b00931