Метод капиллярного электрофореза для одновременного определения нейропептида ГСБ-106 и гиалуронана при создании назальной лекарственной формы

Метод капиллярного электрофореза в варианте капиллярной электрокинетической хроматографии использовали для одновременного определения дипептида ГСБ-106 и гиалуронана натрия с молекулярной массой 130 кДа в составе лекарственной формы, разрабатываемой для интраназальной доставки пептида в ЦНС. Оптимизирован состав фонового электролита (15 ммоль/л тетрабората натрия и 15 ммоль/л додецилсульфата натрия). При положительной полярности пики обоих компонентов на электрофореграмме располагаются в области анионов. Время развития электрофореграммы составляет 10 мин. Разработанная методика позволяет селективно определять оба компонента назальной формы с достаточной чувствительностью; при спектрофотометрическом детектировании пределы определения составляют 8,8 и 76,2 мкг/мл для ГСБ-106 и гиалуронана соответственно. Эффективность определения обоих компонентов оценена числом теоретических тарелок и составляет ~13 000 для ГСБ-106 и ~5500 для гиалуронана. Возможности практического применения методики продемонстрированы при анализе назальной лекарственной формы ГСБ-106. Методика может быть успешно применена для анализа подобных форм на основе гиалуроновой кислоты, в состав которой входят пептиды.

1. Gudasheva T. A., Povarnina P. Yu., Seredenin S. B. Dipeptide mimetic of the brain-derived neurotrophic factor prevents impairments of neurogenesis in stressed mice / Bull. Exp. Biol. Med. 2017. Vol. 162. No. 4. P. 454 – 457. DOI: 10.1007/s10517-017-3638-9

2. Garibova T. L., Kraineva V. A., Kotel’nikova S. O., et al. Behavioral effects of dimeric dipeptide BDNF mimetic GSB-106 in a rat model of depressive-like state / Bull. Exp. Biol. Med. 2020. Vol. 169. No. 2. P. 286 – 289. DOI: 10.1007/s10517-020-04869-8

3. Gudasheva T. A., Povarnina P. Yu., Antipova T. A., et al. Neuroregenerative activity of the dipeptide mimetic of brain- derived neurotrophic factor GSB-106 under experimental ischemic stroke / CNS Neurol. Disord. Drug Targets. 2021. Vol. 20. No. 10. P. 954 – 962. DOI: 10.2174/1871527320666210525090904

4. Povarnina P. Yu., Nikiforov D. M., Vorontsova O. N., Gudasheva T. A. Dipeptide BDNF mimetic GSB-106 prevents depression-like behavior and cognitive impairment caused by ischemic stroke in rats / Probl. Biol. Med. Pharm. Chem. 2022. Vol. 25. No. 2. P. 49 – 53 [in Russian]. DOI: 10.29296/25877313-2022-02-08

5. Correale J., Mattera V., Pasquini J. M. Intranasal delivery route for neurodegenerative diseases: recent insights and future directions / Drug Delivery Transl. Res. 2026. Vol. 16. No. 1. P. 76 – 94. DOI: 10.1007/s13346-025-01919-4

6. Kolyvanov G. B., Zherdev V. P., Gribakina O. G., et al. Comparative preclinical pharmacokinetics and bioavailability of antidepressant GSB-106 tablet form / Bull. Exp. Biol. Med. 2019. Vol. 167. No. 5. P. 637 – 640. DOI: 10.1007/s10517-019-04587-w

7. Zherdev V. P., Kolyvanov G. B., Litvin A. A., et al. Pharmacokinetics of dipeptide mimetic BDNF GSB-106 in rats / Pharmacokinet. Pharmacodyn. 2019. No. 1. P. 37 – 43 [in Russian]. DOI: 10.24411/2587-7836-2019-10038

8. Wei S., Zhai Z., Kong X., et al. The review of nasal drug delivery system: The strategies to enhance the efficiency of intranasal drug delivery by improving drug absorption / Int. J. Pharm. 2025. Vol. 676. 125584. DOI: 10.1016/j.ijpharm.2025.125584

9. Tarasyuk A. V., Sazonova N. M., Shumskii A. N., et al. Physicochemical properties of the original antidepressant GSB-106 and development of a method for the analysis of GSB-106 substance / Pharm. Chem. J. 2019. Vol. 53. No. 1. P. 71 – 78. DOI: 10.1007/s11094-019-01958-5

10. Gribakina O. G., Bochkov P. O., Shevchenko R. V., Zherdev V. P. Validation of the HPLC/MS technique for GSB-106 determination in rats’ blood plasma / Éksp. Klin. Farmakol. 2018. Vol. 81. No. S. P. 60 – 61 [in Russian].

11. Stefanik O., Majerova P., Kovac A., et al. Capillary electrophoresis in the analysis of therapeutic peptides — A review / Electrophoresis. 2024. Vol. 45. Nos. 1 – 2. P. 120 – 164. DOI: 10.1002/elps.202300141

12. Alkrad J. A., Merstani Y., Neubert R. H. H. New approaches for quantifying hyaluronic acid in pharmaceutical semisolid formulations using HPLC and CZE / J. Pharm. Biomed. Anal. 2002. Vol. 30. No. 4. P. 913 – 919. DOI: 10.1016/s0731-7085(02)00329-1

13. Kakehi K., Ueda M., Suzuki S., Honda S. Determination of hyaluronic acid by high-performance liquid chromatography of the oligosaccharides derived therefrom as 1-(4-methoxy)phenyl-3-methyl-5-pyrazolone derivatives / J. Chromatogr. 1993. Vol. 630. Nos. 1 – 2. P. 141 – 146. DOI: 10.1016/0021-9673(93)80449-i

14. Kühn A. V., Raith K., Sauerland V., Neubert R. H. H. Quantification of hyaluronic acid fragments in pharmaceutical formulations using LC-ESI-MS / J. Pharm. Biomed. Anal. 2003. Vol. 30. No. 5. P. 1531 – 1537. DOI: 10.1016/s0731-7085(02)00544-7

15. Rothenhöfer M., Grundman M., Bernhardt G., et al. High performance anion exchange chromatography with pulsed amperometric detection (HPAEC-PAD) for the sensitive determination of hyaluronan oligosaccharides / J. Chromatogr. B. 2015. Vol. 988. P. 106 – 115. DOI: 10.1016/j.jchromb.2015.02.027

16. Ruckmani K., Shaikh S. Z., Khalil P., et al. Determination of sodium hyaluronate in pharmaceutical formulations by HPLC-UV / J. Pharm. Anal. 2013. Vol. 3. No. 5. P. 324 – 329. DOI: 10.1016/j.jpha.2013.02.001

17. Çağlar E. Ş., Üstündağ Okur N., Karasulu H. Y. Development and validation of an HPLC method for the determination of hyaluronic acid active substance in pharmaceutical formulations / J. Res. Pharm. 2022. Vol. 26. No. 1. P. 112 – 122. DOI: 10.29228/jrp.108

18. Ermolenko Yu., Antonova M., Polivanova A., Gelperina S. The method of capillary electrophoresis for quantitative determination of hydrophobized hyaluronic acid in its micellar forms / Anal. Biochem. 2025. Vol. 696. 115684. DOI: 10.1016/j.ab.2024.115684

19. ICH Q2(R2). Validation of analytical procedures — Scientific guideline. https://www.ema.europa.eu/en/ich-q2r2-validation-analytical-procedures-scientific-guideline (accessed April 7, 2026).

20. OFS.1.1.0012. Validation of analytical procedures / State Pharmacopoeia of the Russian Federation (XV ed.). https://meganorm.ru/mega_doc/norm/gosudarstvennaya-farmakopeya/1/ofs_1_1_0012_obshchaya_farmakopeynaya_statya_validatsiya.html?ysclid=mqvbeyrla6278756045 (accessed April 7, 2026) [in Russian].

21. Safarov R., Fedotova O., Uvarova A., et al. Review of intranasal active pharmaceutical ingredient delivery systems / Pharmaceuticals. 2024. Vol. 17. No. 9. 1180. DOI: 10.3390/ph17091180

22. Tai J., Han M., Lee D., et al. Different methods and formulations of drugs and vaccines for nasal administration / Pharmaceutics. 2022. Vol. 14. No. 5. 1073. DOI: 10.3390/pharmaceutics14051073

23. Daku Abubakar B., Rosdan B. S. M., Noratigah M., Nurul A. A. Advances in polysaccharide-based formulations for intranasal drug delivery: A review / J. Drug Delivery Sci. Technol. 2024. Vol. 101. No. 12. 106266. DOI: 10.1016/j.jddst.2024.106266

24. Jin Y.-J., Ubonvan T., Kim D.-D. Hyaluronic acid in drug delivery systems / J. Pharm. Invest. 2010. Vol. 40(spc). P. 33 – 43. DOI: 10.4333/kps.2010.40.S.033

25. Di Cicco M., Alicandro G., Claut L., et al. Efficacy and tolerability of a new nasal spray formulation containing hyaluronate and tobramycin in cystic fibrosis patients with bacterial rhinosinusitis / J. Cystic Fibrosis. 2014. Vol. 13. No. 4. P. 455 – 460. DOI: 10.1016/j.jcf.2014.02.006

26. Vlasenko I. V., Menshutina N. V. Development of nasal pharmaceutical products for systemic exposure: use of permeation enhancers to achieve target product profile / Probl. Biol. Med. Pharm. Chem. 2024. Vol. 27. No. 4. P. 3 – 10 [in Russian]. DOI: 10.29296/25877313-2024-04-01

27. Gudasheva T. A., Tarasyuk A. V., Pomogaibo S. V., et al. Design and synthesis of dipeptide mimetics of the brain-derived neurotrophic factor / Russ. J. Bioorg. Chem. 2012. Vol. 38. P. 243 – 252. DOI: 10.1134/s1068162012030053

28. Tallerova A. V., Povarnina P. Yu., Blynskaya E. V., et al. Antidepressant effect of a dipeptide brain-derived-neurotrophic-factor mimetic (GSB-106) in a generic oral dosage form / Pharm. Chem. J. 2018. Vol. 52. No. 5. P. 397 – 399. DOI: 10.1007/s11094-018-1828-z

29. Pharmaceutical quality of inhalation and nasal products — Scientific guideline / European Medicines Agency (EMA). https:// www.ema.europa.eu/en/pharmaceutical-quality-inhalation-nasal-products-scientific-guideline (accessed April 7, 2026).

30. Illum L. Nasal drug delivery — Recent developments and future prospects / J. Controlled Release. 2012. Vol. 161. No. 2. P. 254 – 263. DOI: 10.1016/j.jconrel.2012.01.024

31. Peer D., Florentin A., Margalit R. Hyaluronan is a key component in cryoprotection and formulation of targeted unilamellar liposomes / Biochim. Biophys. Acta. 2003. Vol. 1612. No. 1. P. 76 – 82. DOI: 10.1016/s0005-2736(03)00106-8

32. Bui V. D., Duong V. H., You D. G., et al. Improving wound healing function and storage stability of stem cell-derived extracellular vesicles via lyophilized hyaluronic acid formulation / J. Nanobiotechnol. 2026. Vol. 24. No. 1. 283. DOI: 10.1186/s12951-026-04201-y

33. Maleki A., Kjøniksen A. L., Nyström B. Effect of pH on the behavior of hyaluronic acid in dilute and semidilute aqueous solutions / Macromol. Symp. 2008. Vol. 274. No. 1. P. 131 – 140. DOI: 10.1002/masy.200851418

34. Ward C. N., LeBlanc P. E., Burrell R. E. Effects of composition and pH on the degradation of hyaluronate and carboxymethyl cellulose gels and release of nanocrystalline silver / J. Appl. Biomater. Funct. Mater. 2024. Vol. 22. 91. DOI: 10.1177/22808000241257124